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植物还原性糖检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-05-31 | 295 次浏览 | 分享到:

植物组织中含有还原糖是一个大类,因为在糖类中,分子结构中含有游离醛基或酮基的单糖,以及含有游离醛基的二糖都具有还原性。从大体上来说,还原糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖等。因为还原糖的特征比较明显,就是含有醛基或酮基。我们需要采用试剂反应的方法,和专门和这些醛基和酮基发生作用,生成显色的产物,就可以通过对产物特征的检测,计算出还原糖的含量。通常的检测方法有3,5-二硝基水杨酸法和斐林试剂滴定法。



菲林试剂法,就是利用还原糖和菲林试剂发生作用,生成砖红色的沉淀。菲林试剂用的是0.1g/mL的NaOH溶液和0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成的,注意要现配现用。还原糖在碱性溶液中,加热的情况下,能够把菲林试剂中的Cu2+还原为Cu+,也就是氧化亚铜,使得蓝色的菲林试剂没有了本身的颜色。


配制好的菲林试剂呈现蓝色的氢氧化铜沉淀,这种沉淀和酒石酸钾钠反应,生成可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热的条件下,以次甲基蓝为指示剂,使用植物组织提取液滴定。提取液中的还原糖会和酒石酸钾钠铜发生反应,生成砖红色的氧化亚铜沉淀,等滴定到终点的时候,稍微过量的还原糖就能够将次甲基蓝转还原,由蓝色马上变为无色,就是滴定的终点了。记录一下滴定过程中消耗的提取液,计算出样品中含有还原糖的量。由于还原糖具有醛基和酮基,在碱性溶液中煮沸,能把斐林试剂中的Cu2+还原成Cu+,使蓝色的斐林试剂脱色,脱色的程度与溶液中含糖量成正比,在590 nm波长下比色测定吸光度值,结合标准曲线,也可以计算出所测样品中还原糖的含量。



3,5-二硝基水杨酸溶液和样品中的还原糖,在加热的条件下,能够还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸化合物。在一定的范围内,还原糖的含量和颜色的变化是成一定线性关系的,在分光光度计的540nm波长处可以测定棕红色物质的吸光度,根据标准曲线,计算出样品中的还原糖含量。


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