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氨基糖含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-05-28 | 194 次浏览 | 分享到:

氨基糖是一种将糖结构上的羟基取代为氨基而形成的一种有机化合物,这个取代的过程需要有专属的合成酶完成。氨基糖它是细胞壁肽聚糖或几丁质的关键组成部分,同时也为蛋白质修饰提供了原料。在细胞的代谢过程中,必须要摄取细胞外的氨基糖。氨基糖为细胞提供营养,为蛋白质提供修饰原料,为细胞提供骨架支撑,是蛋白质N-糖基化、O-糖基化及GPI糖脂合成过程中不可缺少的一个部分。土壤中的氨基糖,标志着微生物的残留情况。因为氨基糖是细胞壁肽聚糖和几丁质的基本组成单位,广泛存在于土壤真菌、细菌以及土壤低等动物中。而土壤氨基糖并不是单一的,它包括了葡糖胺、胞壁酸、半乳糖胺和甘露糖胺。



检测土壤中氨基糖含量的方法有:高效液相色谱(HPLC)法、酶解法、比色法等。


1. 高效液相色谱法(HPLC)


测定土壤中氨基糖的含量,HPLC是常用的一种方法。利用色谱仪将土壤样品中的氨基糖分离出来,并通过检测器获取峰值信号。在检测之初,要对样品进行预处理才能上机检测。而要检测出准确的含量,就要通过梯度稀释的标准品,在HPLC上读取数据和图谱,以此来制作标准曲线,计算回归方程。以检测标准品的条件为条件,同样方式来检测样品,通过读取的数据结合标准曲线,计算出样品中所包含的氨基糖的含量。这种方法分离效果好、灵敏度高、结果准确。但需要对设备足够熟悉,了解检测方法和过程,并能科学判断获得的数据。也有用到气相或气质联用的方法,检测土壤中氨基糖的含量。



2. 酶解法


酶解法就是通过酶解剂,将土壤中的氨基糖转化为可测定的产物。酶解可以在常温下进行,也可以在特定的温度条件下完成,当酶解完成的时候就要有特定的标记物来确定终点。通过酶解的程度来判断样品中含有氨基糖的量。常用的酶解剂有酶解酶和葡萄糖氧化酶,反应的过程中要注意酶解的条件,避免不稳定因素对酶解效果有影响。可以通过特定的标记物,来确定酶反应的情况,最后用荧光或比色的方法来确定氨基糖的含量。此外,还可以用酸水解的方法,通过盐酸或硫酸对样品进行水解,用适当的指示剂进行滴定,可以计算出样品中氨基糖的含量。


3. 比色法


比色法就是通过氨基糖和特定试剂反应,发生颜色的变化。颜色的变化,通过标准品的测定,用分光光度计测定颜色的吸光度值,从而对应已知的浓度值。检测土壤氨基糖含量,主要有这么几个步骤。准备土壤样品,将土壤样品干燥饼过筛,去除掉杂质或大的颗粒。然后,加入适量的缓冲液,混匀离心,得到上清液。更为重要的是,制作标准曲线,这里就不用详细说了。测定土壤样品,要进行显色反应,要满足反应的条件,并在规定的时间内完成,在540nm的波长处读取数据,结合标准曲线来计算出样品中的氨基糖含量。


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