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植物单宁含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-05-22 | 176 次浏览 | 分享到:

单宁,又称鞣酸,或单宁酸。单宁是一种有机化合物,主要来源于葡萄的籽、皮、梗等。单宁是天然的防腐剂、抗氧化剂,被用在食品、药品、化妆品等行业。检测单宁含量,主要的方法有福林酚试剂法、酶解法、高效液相色谱法。



1.福林酚试剂法


这是一种传统的、经典的检测单宁含量的方法,它可以测定植物果实、蔬菜、茶叶等样品。检测的原理也很简单,就是靠样品中的单宁和福林酚试剂发生反应,生成蓝色的化合物。通过比色法测定蓝色化合物的吸光度,从而确定单宁的含量。


先将新鲜可口的葡萄样品粉碎,或在组织捣碎机中匀浆,加入20mL80%的甲醇、3600r/min,离心5min,取上清液。然后,定容至100mL。


以没食子酸为标准品,取5个梯度浓度的没食子酸标准溶液,分别加入蒸馏水,钨酸钠-钼酸钠混合液和碳酸钠溶液,混匀后的没食子酸的浓度为1.0 mg/L,2.0 mg/L,3.0 mg/L,4.0 mg/L,5.0 mg/L,显色,放置 2 h,以标准曲线 0.0 mg/L 为空白。使用紫外可见分光光度计,波长为765nm测定吸光度。以浓度为纵坐标,以吸光度为横坐标,制作标准曲线。


将提取到的单宁样品溶液,按同样的方法显色,放置2h,以0.0mg/L为空白,在765nm波长下测定样品溶液吸光度,根据标准曲线计算出样品中的单宁含量。



2.高效液相色谱(HPLC)法


HPLC法测定单宁含量,是一种比较高效、准确、灵敏的方法,它常用于测定茶叶啊,葡萄酒啊,草药等单宁含量。这种方法的基本原理,就是利用色谱柱将样品中的单宁和其他化合物分离出来,通过测定峰面积的方式,来测定样品中的单宁含量。



样品准备是要充分考虑的,它包括将样品粉碎,加入适量的溶剂,离心提取等详细的步骤。对样品的保存是不容忽略的,为了尽可能的准确测量出单宁的含量,操作要求和环境条件是需要确定的。其次,为了检测准确,还需要对仪器设备进行调试。主要是选择最佳的检测条件,有的是现成的方法,有的需要开发和验证,从色谱柱、柱温、流动相、进样量、流速、检测器的检测波长等方面进行设置。然后,就要使用标准品上机检测,标准品梯度进样,是为了分别得到梯度的峰值,制作出来一条能够覆盖到样品浓度的标准曲线。最后,将样品进样检测,根据得到的峰高/峰面积,结合标准曲线,计算出样品中的单宁含量。


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