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土壤纤维素酶活性测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-05-07 | 15 次浏览 | 分享到:

纤维素酶是一类降解纤维素生产葡萄糖的酶,它不是单独的个体,而是相互协同作用的酶系,或叫复合酶。大致上来说,它主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶等组成。就像一把剪刀一样,把纤维素分解成寡糖或单糖。纤维素酶分布是比较广泛的,细菌、真菌和动物体内都能产生纤维素酶。在土壤中也有,土壤中的纤维素酶可以分解土壤中的纤维素,从而转化成有利于植物生长的营养成分,增强土壤的肥力。因此,土壤中纤维素活性的检测,就具有比较重要的农业价值。



检测纤维素酶活性,其实方法也是比较简单的。通过纤维素酶作用前后底物的变化,来判断出来纤维素酶的作用能力强弱。检测方法包括:蒽酮比色法、3,5-二硝基水杨酸比色法、分光光度法、荧光分析法等。



默认土壤中含有纤维素酶,土壤样品代表纤维素酶样本。将土壤样品和纤维素底物混合,在一定的条件下进行培养,让土壤中的纤维素酶尽可能的发挥它的潜力。这个时候,就要检测纤维素底物的变化。怎么测定纤维素底物的变化呢?这就要通过特定的标记物,通过标记物的颜色变化,再对它进行量化处理。通过蒽酮比色法,测定底物所产生的还原糖含量,可以计算出纤维素酶活力。酶活并不是含量,酶活是它在实验的条件下的分解能力。纤维素被水解的过程中会产生还原糖,除了蒽酮比色法,还可以用3,5-二硝基水杨酸比色法。底物生成的还原糖可以和3,5-二硝基水杨酸发生反应,生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸,这个颜色的变化程度就和还原糖量就有了关系。通过分光光度计可以测定还原糖含量,在测定的过程中要做空白对照。



在进行土壤纤维素酶活性测定时,通常需要考虑土壤样品的预处理、反应条件的控制、标准曲线的制作以及最终活性单位的计算等因素。


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