β谷甾醇是一种天然的植物甾醇,它广泛的存在于水果、蔬菜、坚果、种子、大豆油和棉籽油等中。它的化学式C30H52O,分子量414.707,易溶于氯仿、二硫化碳,微溶于乙醇、丙酮,不溶于水,被用于医药原料、食品、化妆品等工业领域。从科研方面来说,它具有调节胆固醇水平,免疫调节,抗炎,抗氧化和细胞保护等作用。
β谷甾醇是一种天然的植物甾醇,它广泛的存在于水果、蔬菜、坚果、种子、大豆油和棉籽油等中。它的化学式C30H52O,分子量414.707,易溶于氯仿、二硫化碳,微溶于乙醇、丙酮,不溶于水,被用于医药原料、食品、化妆品等工业领域。从科研方面来说,它具有调节胆固醇水平,免疫调节,抗炎,抗氧化和细胞保护等作用。
检测样本中的β-谷甾醇含量,常用的方法是高效液相色谱(HPLC),气相色谱(GC),也有用到气相色谱质谱联用(GC-MS)的。气相色谱测的话,需先衍生化(如硅烷化)生成挥发性衍生物,通过气相色谱柱分离,氢火焰离子化检测器(FID)或质谱检测器(MS)定量。以HPLC为例,简单的介绍一下检测流程。
1.样品处理
植物样品一般用正己烷或石油醚提取脂质,用KOH乙醇溶液皂化水解脂肪酸,用正己烷萃取游离甾醇。浓缩萃取液,0.45um膜过滤,待测。
2.色谱条件
采用C18反相色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径,柱温30-40℃或设置35℃。以甲醇和水为流动相(95:5),等度洗脱。紫外检测器,波长为205nm或210nm,进样量10uL。仅供参考。
3.标准曲线
用β谷甾醇的标准品用甲醇进行溶解并定容到一定的浓度,称为β谷甾醇的标准母液。梯度稀释5-7个浓度点,这个稀释的倍数可以是2,5,10等,尽可能的覆盖到样本溶液的浓度范围,这里需要考虑的是hplc的检测限。将各个浓度标准品进样到HPLC中,对各个色谱峰的面积进行积分,拟合标准曲线,得到回归方程。
4.样品测定
根据保留时间,可以对样品的色谱峰确定β谷甾醇的峰。对这个峰面积进行积分,并代入到回归方程,计算出样品溶液中的β谷甾醇的含量。