组胺是一种含氮的有机化合物,是由组氨酸在脱羧酶的作用下产生的。一般存在于皮肤、肺部和肠粘膜的肥大细胞中,当发生炎症的时候,就会释放出组胺来了。组胺会让血管舒张,增加毛细血管和微静脉的管壁通透性,血浆进入到组织中就会导致局部水肿。组胺的化学式为C5H9N3,分子量111.145,由咪唑环(含氮杂环)与乙胺基团通过两个碳原子连接构成。组胺易溶于水,可溶于乙醇,微溶于乙醚,氯仿等。在日光下容易变质,需避光保存。
组胺是一种含氮的有机化合物,是由组氨酸在脱羧酶的作用下产生的。一般存在于皮肤、肺部和肠粘膜的肥大细胞中,当发生炎症的时候,就会释放出组胺来了。组胺会让血管舒张,增加毛细血管和微静脉的管壁通透性,血浆进入到组织中就会导致局部水肿。组胺的化学式为C5H9N3,分子量111.145,由咪唑环(含氮杂环)与乙胺基团通过两个碳原子连接构成。组胺易溶于水,可溶于乙醇,微溶于乙醚,氯仿等。在日光下容易变质,需避光保存。
检测组胺含量的方法,实验室常用到高效液相色谱(HPLC)、液相色谱质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附(ELISA)法、比色法等。以HPLC为例,简单的介绍一下过程。技术参数比较粗略,如果要详细的操作步骤和参数,可咨询或参考相关的文献资料。
1.样品前处理
使用0.4mol/L的高氯酸溶液提取样品中的组胺,提取出来还要用10mg/mL的丹磺酰氯溶液进行衍生化处理,便于后续的HPLC测定。衍生化处理,是为了提高检测灵敏度。
2.色谱条件
C18色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径;常用的流动相为甲醇和乙酸铵,流速为1ml/min,紫外检测器,波长254nm,进样量10-20uL。
3.标准曲线
用组胺的标准品配制出标准溶液母液,比如1mg/mL,梯度稀释6个浓度点并记录下来。衍生化处理后,进样到HPLC测各个浓度的色谱峰。由于标品是相对纯的,测出来的色谱峰要符合要求,在前期方法开发的时候就要先调整好各个参数,避免出现错误或浪费现象。对各个浓度点测出来的色谱峰,记录它们的保留时间,并对它们的峰面积分别进行积分处理,对应它的浓度,在表格中可以拟合出标准曲线,得到回归方程。
4.样品测定
样品的测定过程是相似的,根据保留时间,找到色谱峰,并对色谱峰面积进行积分,代入到回归方程,计算出样品溶液中的组胺含量。