山奈酚是一种黄酮类化合物，常见于茶叶、西兰花、葡萄、苹果、绿豆、桂皮、草莓、葡萄柚、南瓜、马铃薯、番茄等植物中。山奈酚具有多种生物活性，比如抗氧化、抗炎、调节代谢等。它是一种次生代谢产物，在医药、保健和日化等领域具有重要应用价值。山奈酚化学式为C15H10O6，分子量286.2，微溶于水，溶于热乙醇、乙醚或碱溶液。其核心结构为黄酮母核（C6-C3-C6），官能团包括羟基、醚键、碳碳双键等，有两个环。山奈酚在植物中通常以不同的糖苷形式存在，如紫云英苷（山奈酚-3-O-葡萄糖苷）。

常见的检测方法：高效液相色谱（HPLC）、液相色谱质谱联用（LC-MS）等。以HPLC为例，简单的介绍一下流程。

1.样品前处理

精确称取0.2g的样本，这个样本可能是植物的，如果是植物的话，就是要研磨成粉末的，这样便于后期的提取。将样本加入到15ml的离心管中，再加入5ml的80%甲醇水。你说为什么要用甲醇和水呢，因为在流动相中一般也经常会用到甲醇。为什么还要加水呢，之前我们说过，山奈酚是微溶于水的，如果完全不加水，有可能会损失一部分的含量。甲醇和水加入到离心管中和样本粉末接触，光浸泡是不行的，为了提高效率，放在振荡器上充分的振荡混合1min，室温的条件下超声30min。这个时候，样本中的有机物基本上就溶出到溶液中了。于是，用4000r/min的离心10min。这个离心转速和时间，并不是随意的设置的，这是根据实践经验，获得的最优化设计的方案。为了更准确的获得山奈酚，将上清液转移到新的离心管中。剩下的残渣怎么办，表面肯定还有一些，就按上述的操作再来一遍，这样就提取的差不多了，将上清液合并到新的离心管中，氮吹到2ml混匀。用0.22um的膜过滤，待测。

2.色谱条件

C18的色谱柱是目前使用比较广泛的，250mm长，4.6mm的内径，5um粒径。柱温30℃，一般情况下的色谱柱温在25-35℃，在实际环境和操作过程中是可以根据色谱出峰情况进行调整的。如果温度过高或过低，都会影响到峰的面积或基线，对结果会有比较大的偏差。流动相这里采用的是0.1%磷酸水和甲醇，梯度洗脱的。具体多少时间，多少比例，是根据经验来的，在方法开发的时候也会逐步调整。检测器的话，有用UV的，也有用DAD的，波长一般选择280nm。流速设置为0.8-1ml/min，进样量10-20uL。

3.标准曲线

要做标准曲线，就先配制标准溶液。精确的称取山奈酚标准品5mg，倒入到5ml的棕色的容量瓶中，加入适量的甲醇溶解，并用甲醇定容到刻度，摇匀后就成了1mg/ml的山奈酚标准溶液母液。一般在-20℃保存，如果要现配现用，就进行梯度稀释6个浓度点，确保能够覆盖到样品溶液的浓度，考虑定量限。依次进样到HPLC中，记录出峰的保留时间，对各个峰面积进行积分处理。在表格中，色谱峰面积对应它的标准溶液浓度，可拟合出标准曲线，得到回归方程。

4.样品测定

有手动进样和自动进样，一般都是自动进样。根据HPLC的出峰情况，判断是否需要调整。如果出峰是正常的，根据保留时间可以识别出目标色谱峰，对峰面积进行积分，并代入到回归方程，可计算出样品溶液中的山奈酚含量。