苏氨酸是人体必需氨基酸之一,必需靠外在的食物获得,它主要参与蛋白质的合成,脂质代谢,调节营养代谢和肠道功能,稳定情绪变化和促进肌肉生长。苏氨酸主要来源于植物的谷物,蘑菇,绿色蔬菜,花生,胡萝卜等,以及动物的肝脏,肉类,蛋类,乳制品等。苏氨酸的化学式为C4H9NO3,分子量为119.12,具有旋光性,易溶于水,微溶于乙醇,不溶于乙醚。苏氨酸的代谢途径主要分为三条:1.通过醛缩酶催化代谢为甘氨酸和乙醛;2.通过苏氨酸脱酶(TDG)代谢为氨基丙酸、甘氨酸、乙酰COA;3.通过苏氨酸脱水酶(TDH)代谢为丙酸和α-氨基丁酸。
苏氨酸是人体必需氨基酸之一,必需靠外在的食物获得,它主要参与蛋白质的合成,脂质代谢,调节营养代谢和肠道功能,稳定情绪变化和促进肌肉生长。苏氨酸主要来源于植物的谷物,蘑菇,绿色蔬菜,花生,胡萝卜等,以及动物的肝脏,肉类,蛋类,乳制品等。苏氨酸的化学式为C4H9NO3,分子量为119.12,具有旋光性,易溶于水,微溶于乙醇,不溶于乙醚。苏氨酸的代谢途径主要分为三条:1.通过醛缩酶催化代谢为甘氨酸和乙醛;2.通过苏氨酸脱酶(TDG)代谢为氨基丙酸、甘氨酸、乙酰COA;3.通过苏氨酸脱水酶(TDH)代谢为丙酸和α-氨基丁酸。
检测样品中苏氨酸的方法,实验室常用到高效液相色谱(HPLC)。
1.样品处理
先称取0.1g,倒入到15ml离心管中,再加入1ml的6mol/L的HCl,盖上盖子,在振荡器上充分混匀5min,放入105℃的烘箱中水解24h。等完成后,拿出来用冷水冷却到室温状态,看看里面的液体有没有损失,如果有损失就用上面的HCl来补充。后面,就加入1ml的6mol/L的NaOH溶液,继续振荡混匀5min。放到4000r/min离心10min,取上清液准备进行衍生化处理。

取0.5ml上面得到的上清液,放到15ml棕色的离心管中,加入pH=9.0 碳酸氢钠缓冲溶液和DNFB各0.5ml,放入60±0.5℃水浴中,避光反应60min。用冷水冷却至室温,加入3.5ml pH=7.0磷酸缓冲溶液,充分混匀,室温避光反应15min,取上清液过0.22μm 滤膜待测。

2.色谱条件
C18色谱柱:250*4.6mm;5μm,柱温:38℃。紫外检测器,波长360nm;流动相:A:乙腈:甲醇=90:10 B:0.02mol/L磷酸二氢钠+磷酸氢二钠,梯度洗脱;流速1ml/min,进样量10uL。仅供参考。

3.标准曲线
将苏氨酸的标准品进行溶解和稀释。成倍的稀释,比如2mg/L,5mg/L,10mg/L,20mg/L,50mg/L,100mg/L。进样到HPLC测出对应的色谱峰,记录色谱峰的保留时间,对色谱峰面积进行积分,对应标准溶液的浓度,拟合标准曲线,得到回归方程,相关系数R2要大于0.999并接近于1。
4.含量计算
将样品进样到HPLC,识别出目标化合物的色谱峰,对峰面积进行积分,并代入到回归方程,计算出样品中的苏氨酸含量。