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隐黄质的检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-03-07 | 45 次浏览 | 分享到:
隐黄质接近于β胡萝卜素,比β-胡萝卜素多一个羟基,2个含有4个甲基的20碳分子对尾连接而成,属聚异戊二烯复合物。它是类胡萝卜素中叶黄素的一种,属于天然的植物色素,来源于水果,蔬菜,蛋黄等。化学式为C40H56O,分子量为552.89。具有中和自由基,降低氧化应激损伤的作用。在人体内,隐黄质可以转变为维生素A,参与调节免疫功能和视力。

隐黄质接近于β胡萝卜素,比β-胡萝卜素多一个羟基,2个含有4个甲基的20碳分子对尾连接而成,属聚异戊二烯复合物。它是类胡萝卜素中叶黄素的一种,属于天然的植物色素,来源于水果,蔬菜,蛋黄等。化学式为C40H56O,分子量为552.89。具有中和自由基,降低氧化应激损伤的作用。在人体内,隐黄质可以转变为维生素A,参与调节免疫功能和视力。



目前来说,实验室检测样品中的隐黄质的含量,主要有高效液相色谱(HPLC)法。


1.样品处理


样本要求:固体样本量≥0.2g,液体≥0.2mL。将样品中的隐黄质提取处理,是需要一套完整的,有效的方法,遵循标准操作流程完成。比如,用0.1%的二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的乙醇溶液和60%氢氧化钾水溶液,在50℃的水浴中振荡皂化。之后,用正己烷-乙醚-环己烷混合溶剂萃取。经过氮吹或旋转蒸发浓缩,用甲醇或乙腈复溶,并用0.45um滤膜过滤,待测。


2.色谱条件


采用常规的C18色谱柱,250mm长,内径4.6mm,粒径5um,柱温30℃;以乙腈-水等度洗脱,或乙腈-甲醇梯度洗脱,流速1ml/min;紫外检测器,根据实际情况确定波长,比如450nm;进样量10-20ul,根据出峰情况调整。



3.标准曲线


使用隐黄质的标准品,用流动相溶解,梯度稀释5-7个浓度点。浓度是逐渐变低的,要考虑到稀释的最后一个点,在检测器的有效范围内,一般是信噪比的5-10倍的地方。通过有效的色谱条件,依次上机测定各个浓度点的标准品,对出峰情况进行判断,并确定对应的色谱峰,积分处理。可以在办公软件中,使用函数公式来做标准曲线,得到回归方程,相关系数r2>0.999。需要方法学验证的时候,要确定隐黄质的良好的线性范围,检出限,定量限,加标回收率,重复性RSD等。


4.样品测定和计算


将处理好的样品,上机测定对应出对应的色谱峰。对色谱峰面积进行积分,根据回归方程,计算出样品中的隐黄质含量。


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