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植物氨基酸含量测定
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2025-01-13 | 147 次浏览 | 分享到:
植物在生长代谢的过程中会需要氨基酸,氨基酸的种类有很多,从目前的科学研究来看,植物必需的氨基酸有8种:苯丙氨酸,异亮氨酸,赖氨酸,亮氨酸,甲硫氨酸,缬氨酸,色氨酸,苏氨酸。当然,还有其他种类的氨基酸。其他的氨基酸在代谢的过程中也起着很重要的作用,比如丙氨酸能够增强叶绿体的合成,调节气孔关闭,保持水分的平衡。谷氨酸能刺激植物不断生长,增强恶劣环境的适应能力。甘氨酸能提高光合作用效率,增加糖分的含量,提升农作物果实的品质等。在植物代谢的过程中,氨基酸并不是独立的,而是相互关联并不断作用而产生的。

植物在生长代谢的过程中会需要氨基酸,氨基酸的种类有很多,从目前的科学研究来看,植物必需的氨基酸有8种:苯丙氨酸,异亮氨酸,赖氨酸,亮氨酸,甲硫氨酸,缬氨酸,色氨酸,苏氨酸。当然,还有其他种类的氨基酸。其他的氨基酸在代谢的过程中也起着很重要的作用,比如丙氨酸能够增强叶绿体的合成,调节气孔关闭,保持水分的平衡。谷氨酸能刺激植物不断生长,增强恶劣环境的适应能力。甘氨酸能提高光合作用效率,增加糖分的含量,提升农作物果实的品质等。在植物代谢的过程中,氨基酸并不是独立的,而是相互关联并不断作用而产生的。



检测植物中的氨基酸种类和含量,对了解植物的代谢过程,种类的作用,含量的变化,都是非常有必要的。一般情况下,检测氨基酸含量,是通过高效液相色谱(HPLC)法。当然,这并不是唯一的方法,现在有现成的标准和操作步骤参考。在实际操作的过程中,需要对方法,特别是色谱条件进行验证,从而获得有效的色谱峰,有利于得到准确的计算结果。


以HPLC为例,检测过程包括了前处理,色谱条件,色谱峰和原始数据,标准曲线,计算结果等。


1.前处理


前处理也称为样品提取,提取出目标氨基酸。它包括了水解和衍生步骤。将0.2g的样品,放入15ml的离心管中,加入2ml的6mol/L的HCL,充分振荡5min。放入105℃的烘箱,水解24h。冷却到室温,用HCL补充挥发的部分。用6mol/L的NaOH溶液调节到中性,用水定容到5ml,振荡5min。4000r/min的离心,10min内可以获得相对清澈的上清液。



衍生的过程,就是将0.5ml的上述的提取液,加入pH=9.0的碳酸氢钠缓冲液和DNFB各0.5ml,加入60℃的水浴中,避光反应60min。取出,冷却到室温,加入3.5ml的pH=7.0的磷酸缓冲溶液,充分混匀,避光反应15min,取上清液0.22um膜过滤。


2.色谱条件



检测器:DAD  C18色谱柱:250*4.6mm; 5μm    

柱温:38℃      流速:1ml/min   进样量:20μL   波长:360nm  

流动相:A:乙腈:甲醇=90:10   B:0.02mol/L磷酸二氢钠+磷酸氢二钠


3.标准曲线



将目标氨基酸进行稀释,成倍的,梯度稀释5-7个浓度点。以上述的色谱条件,测定对应的色谱峰。对色谱峰面积进行积分,结合对应点的标准品浓度,绘制标准曲线,得的回归方程。一般情况下,相关系数r2>0.999,重复性符合规定要求。


4.计算结果


对样品进行测定,根据样品的色谱峰面积,结合回归方程,可以计算出样品的氨基酸含量。



氨基酸:天冬氨酸,苏氨酸,谷氨酸,脯氨酸,甘氨酸,缬氨酸,γ-氨基丁酸(GABA),苯丙氨酸,组氨酸,精氨酸,丙氨酸,酪氨酸,甲硫氨酸,异亮氨酸,亮氨酸,赖氨酸,半胱氨酸,刀豆氨酸,天冬氨酰,高丝氨酸,犬尿氨酸,色氨酸,瓜氨酸,羟脯氨酸,半胱氨酸,鸟氨酸,牛磺酸,氨基环丙烷羧酸,聚谷氨酸,谷氨酸钠,对氨基苯甲酸等。


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