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植物甾醇酯检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-12-26 | 214 次浏览 | 分享到:

植物甾醇酯一般是由植物甾醇和脂肪酸,通过酯化反应而形成的。主要的甾醇酯有β-谷甾醇酯,豆甾醇酯,油菜甾醇酯。甾醇酯能够在人体内转化为甾醇和脂肪酸,具备了甾醇和脂肪酸的两大生理功能。化学式为C29H50O,植物甾醇酯具有一定的抗氧化性,可以帮助中和自由基,降低氧化应激对人体的伤害。一般是通过植物油经过皂化,萃取,结晶等工艺提取,可以作为化学工业或药物合成方面的原料和中间体。植物甾醇酯是一种脂溶性化合物,植物甾醇酯的油溶性远高于植物甾醇。



检测植物甾醇酯含量的方法,有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、气相色谱-质谱(GC-MS)法,薄层色谱法等。


1.高效液相色谱(HPLC)法


将含有植物甾醇酯的待测样品,加入乙酸乙酯溶剂中,超声处理。用乙酸乙酯定容,可以得到待测的植物甾醇酯。


色谱条件:C18色谱柱,柱温30℃;以乙腈和水为流动相,流速为1.0ml/min;紫外检测器,波长208nm。进样量10ul,仅供参考。



标准曲线:采用标准品,进行稀释。成倍的,梯度的稀释,至少6个点的浓度。确保这个浓度范围,在检测器的有效范围。依据有效的色谱条件,测出色谱峰。对标准品各个浓度点的峰面积进行积分,并结合对应点的浓度,绘制出标准曲线,得到回归方程。相关系数一般都是大于0.999,确保标准曲线是有用的,测出来的数据是可靠的。重复性也是要考虑的,确保测出的数据在特定范围内是稳定的,可信的。


样品测定:根据标准曲线的色谱条件,进样测定色谱峰。正常的,顺利的情况下,对色谱峰进行积分,结合标准曲线,可以计算出样品中的甾醇酯含量。


2.气相色谱(GC)法


使用气相色谱法测甾醇酯含量,需对样品进行预处理。将样品放在乙醇氢氧化钾,水浴,超声,皂化,水解甾醇酯。正庚烷萃取,在水浴中使用吡啶进行衍生化处理。



色谱条件:使用hp-5的高温色谱柱,火焰离子化检测器(FID),载气用氦气或氮气,进样量1-2ul。柱温,初设温度为150℃,以一定的速率升温到300℃,并保持一段时间。检测器一般设置300℃,分离比为10:1,根据实际情况进行调整。


同样,采用标准曲线或内标法测定含量。


此外,还可以使用GC-MS,薄层色谱法测定。


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