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二氢槲皮素检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-11-14 | 509 次浏览 | 分享到:
二氢槲皮素是一种具有多种生物活性的二氢黄酮类化合物,广泛存在于多种植物中,具有抗氧化、抗病毒、抗炎等作用。在食品工业中,它被用作生物活性添加剂,以延长食品保质期。测定其含量通常采用高效液相色谱(HPLC)法,通过样品处理和色谱条件优化,确保准确测定其含量,以实现其预期的生物活性效果。

二氢槲皮素,又叫紫杉叶素,是一种二氢黄酮类化合物,具有五个酚羟基。化学式C15H12O7,分子量304.25,易溶于乙醇、乙酸、沸水,微溶于冷水,几乎不溶于苯。它存在于很多的植物中,比如葡萄、柑橘类水果,松树,水飞蓟,樱桃,蔷薇等。具有抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗发炎、血管舒张和抗菌等作用,在食品工业,作为食品生物活性添加剂,可以使食品原料和食品本身防腐、增加保质期。



常用的方法,是高效液相色谱(HPLC)法。为什么要测它的含量呢,基于它的作用。含量的多少,会直接影响到影响作用。比如,多少量的二氢槲皮素,能够起到什么样的作用。这个剂量是需要验证的,可靠的。如果想要起到对应的作用,而对剂量把握不准确,怎么可行呢?一般情况下,在科研方面,需要有实事求是的精神。



样品处理:粉碎-乙醇回流-减压-0.22um过滤。一般的实验,都是有相对准确的操作步骤,按照要求和注意事项,不增加不减少,提取出样品中的目标化合物,供HPLC测试。



色谱条件:色谱条件是要考虑多方面的因素确定的。根据化合物的性质,选择适合的流动相将它洗脱出来,为了更好的出峰,需要对流速进行确定。色谱柱是一个吸附分配功能,将化合物从样品中分离,并按一定的次序被流动相洗脱出来。柱温的高低,会影响到基线,最终使峰面积不准确。进样量的大小,也会影响出峰,它和流动相是相关联的。



比如C18的反相色谱柱,柱温设置为30℃。用甲醇和水为流动相,流速1.0ml/min足够让二氢槲皮素洗脱出来。对于检测器,大多数情况下是紫外检测器,根据最强吸收波长,可以用320nm。对于进样量,通常为10-20ul,尝试比较理想的毫升。进样方式,可以自动,也可以手动,看实际要求。



标准曲线:这个是定量检测的常用方法。通过将标准品溶液梯度稀释6个点,依次进样到色谱仪中,记录浓度。软件中读取色谱数据和色谱峰,在理想的情况下,对色谱峰面积进行积分,并根据色谱峰面积和对应标准溶液关系,绘制标准曲线,回归方程。要关心的是,相关系数r2>0.999,RSD<2%。


样品测定:对样品进行测定,记录色谱峰面积。根据标准曲线,计算样品的二氢槲皮素含量。


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