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氨基氮含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-10-30 | 331 次浏览 | 分享到:
氨基氮是植物代谢产物,以NH2形式存在,是蛋白质分子的基本单位氨基酸的组成部分。测定氨基氮含量前需去除氨基酸、氨、酰胺、硝酸氮和亚硝酸氮等非蛋白质氮。测定方法包括比色法和滴定法。比色法中,氨基氮与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色衍生物,通过吸光度测定含量。滴定法中,氨基氮与中性甲醛反应生成羧酸,用NaOH滴定,根据消耗的NaOH体积计算氨基氮含量。

氨基氮是植物有机体代谢的产物,它以NH2的形式存在,是蛋白质分子的基本单位-氨基酸的组成部分。它是可能是植物体内合成的,或者是蛋白质分解后的产物。它是植物内氮代谢动态变化的指标之一。由于氨基酸和氨、酰胺、硝酸氮、亚硝酸氮均属于非蛋白质氮,测氨基氮的时候,要先将这些形态的氮去除,再对氨基氮含量测定。



测定氨基氮含量的方法,其实比较简单的,可以用比色法。不过,前处理的过程,需要认真完成。


蛋白质氮去除:将样品(如植物的茎叶)研磨成粉,烘干至恒重,用2%三氯乙酸浸泡,摇床振荡60min,过滤,滤液就是非蛋白质氮。


其他形态氮去除(仅供参考):取上述滤液,以NaOH调整pH值,加入等量体积的饱和硼酸盐(pH10),蒸馏游离氨,用5-10mL2%硼酸吸收。蒸馏后,换上另外一个盛有硼酸的三角瓶,加5ml4%NaOH入样品中,将酰胺氮蒸馏到5-10ml2%硼酸中。蒸馏后,关闭蒸汽流。再换上新的硼酸三角瓶,加入0.2g代发达氏合金,再接到蒸发器上。慢慢通气,防止发生飞溅。



1.比色法


在pH 4.8的乙酸钠-乙酸缓冲液中,氨基氮与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4二氢化吡啶氨基酸衍生物。这种衍生物在波长400nm处有吸光度,通过制作标准曲线,与样品测定的吸光度值,可以计算氨基氮的含量。样品测定,可以进行适当的稀释,记录稀释倍数。同时,可以多测几次,求取平均值。


2.滴定法


检测原理:氨基氮能够和中性甲醛发生反应,生成羧酸,用NaOH可以滴定。


精密量取滤液2.50ml至250ml锥形瓶中,加入20ml蒸馏水,摇匀,加甲基红指示剂2-3滴,用0.1mol/l盐酸调至红色,放置3分钟,用0.03569mol/L氢氧化钠溶滴定液调至黄色。用定量加液器向锥形瓶内加入5.0ml中性甲醛,摇匀放置5分钟,再加入3滴酚酞指示剂,用标准氢氧化钠滴定至微红色即为终点,记录所消耗标准氢氧化钠溶液的体积。根据公式,可以计算出氨基氮的含量。


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