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赖氨酸含量测定方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-10-23 | 325 次浏览 | 分享到:
赖氨酸是一种必需氨基酸,主要存在于动物性食物和豆类中,对生长发育和免疫力有重要作用。赖氨酸有L型、D型、DL型三种构型,仅L型可被生物体利用。检测赖氨酸的方法包括高效液相色谱(HPLC)法和茚三酮比色法。HPLC法通过调节流动相和pH值优化分离,衍生化处理后测定含量。茚三酮比色法则通过生成紫红色物质,测定吸光度计算含量。

赖氨酸是一种碱性的,必需氨基酸之一。必须从食物中补充,主要存在于动物性食物和豆类中。此外,杏仁、榛子、花生仁、南瓜子仁等坚果中赖氨酸含量也比较多。它能够促进人体生长发育,增强免疫力,促进脂肪氧化和营养吸收,参与能量代谢和蛋白质合成等。按光学活性来说,赖氨酸有L型、D型、DL型三种构型,只有L型才能被生物体利用。



检测方法:高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、茚三酮比色法等。


1.高效液相色谱(HPLC)法


色谱条件一般是根据不同的实验需求,进行必要的验证或进行调整。比如采用C18的色谱柱,以甲醇和0.1%TEA溶液为流动相,流速1.0ml/min,紫外检测器,波长为326nm,进样量10-20uL。通过调节流动相的组成比例和pH值,优化分离和峰形。



赖氨酸含量测定,可以对样品进行衍生化处理。在碱性的条件下,赖氨酸的氨基可与2,4-二硝基氯苯反应生成二硝基苯赖氨酸衍生物。通过色谱条件,对样品进行处理,并在HPLC测定色谱峰。首先,要对标准品进行梯度稀释,至少6个点,在同样的色谱条件下测定色谱峰。以色谱峰面积为纵坐标,对应标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程和回收率。相关吸收R2>0.999。根据公式,计算出样品中赖氨酸的含量。


2.茚三酮比色法


赖氨酸和茚三酮在弱酸条件下,进行适当的加热,可以生成紫红色的物质。而且,这个颜色和赖氨酸的含量是呈一定的关系的。



配制不同浓度的赖氨酸溶液 , 加入 1.0mLpH为 6.0 的醋酸盐缓冲溶液和 1.0mL茚三酮试剂 ,水浴加热 15min, 冷却 10min后定容, 在 570nm处测定其吸光度 , 浓度和吸光度关系曲线。准确量取 2.0mL赖氨酸溶液, 加入一定量的缓冲溶液和茚三酮试剂, 水浴加热, 冷却后定容至 25mL, 在 570nm处测定其吸光度。根据标准曲线的回归方程和样品的吸光度,可以计算出样品中的赖氨酸含量。一般情况下,样品测定以空白试剂为对照,重复三次,求取平均值。


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