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蒽酮法测定可溶性糖
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-30 | 461 次浏览 | 分享到:
可溶性糖主要由单糖和双糖组成,广泛存在于植物的根茎和种子中,是人体热量的主要来源。检测可溶性糖的方法包括蒽酮比色法、斐林试剂法、气相色谱法和高效液相色谱法等。蒽酮比色法通过硫酸作用下生成糠醛,再与蒽酮反应生成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量呈线性关系。检测步骤包括样品准备、样品测定、标准曲线绘制和结果计算。样品需粉碎研磨,精确称量后进行提取和测定,最终根据标准曲线计算可溶性糖含量。

可溶性糖主要是指单糖(葡萄糖和果糖)和双糖(蔗糖)组成,是植物体内的一种很重要的碳水化合物。可溶性糖含量决定了农作物的生长情况,以及果实的品质。可溶性糖广泛存在于植物的根茎和种子中,是人体热量的主要来源,具有较高的营养价值。检测可溶性糖的方法有多种,比如蒽酮比色法、斐林试剂法、气相色谱法、高效液相色谱法等。



蒽酮比色法测可溶性糖含量


检测原理:可溶性糖在硫酸的作用下生成糠醛,糠醛再和蒽酮发生脱水、缩合反应,生成绿色的络合物,颜色的深浅和糖含量是呈线性关系的。用波长为625nm的分光光度计测定可溶性糖的吸光度值,根据标准曲线,可以计算出样品中的可溶性糖含量。需要注意的是,蒽酮试剂和糖反应呈现的颜色,是随着时间发生变化的。为了准确测定,需要在规定的时间内完成测定,并记录数据。



检测步骤:


1.样品准备:将样品粉碎研磨,精确称量100mg,置于15ml的离心管中,加入10ml的80%乙醇,盖上盖子,保持在80℃水浴中30min,取出离心。将上清液转移到50ml的烧杯中,重复2次提取。将上述提取液在80℃水浴上,使得乙醇蒸发,只剩下3ml的液体,用蒸馏水定容到25ml。


2.样品测定:吸取5ml的糖提取液到25ml容量瓶中,用蒸馏水定容。取2ml稀释液到比色管中,缓缓加入配制好的蒽酮试剂10ml,摇匀30s。放在沸水浴中加热10min,反应完全后,取出放入冷水中迅速冷却,10min后显色稳定。在分光光度计620nm的波长下测定吸光度值,并记录数据,可以重复三次,求取平均值。


3.标准曲线:称取1g葡萄糖到1L的容量瓶中,用蒸馏水定容。并从这个溶液中吸取1,2,4,6,8,10ml注入到100ml容量瓶中,用蒸馏水定容到刻度,摇匀,制成了标准溶液。分别注入到7个比色管中,加入蒽酮试剂,按上法测定吸光度值。以标准溶液的浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标,绘制出葡萄糖的标准曲线。


4.计算结果:根据测定样品的吸光度值,看是否在标准曲线的范围内。如果超过了范围,需要将样品进行适当的稀释,并重新测定,确保在范围内。根据标准曲线的回归方程,可以计算出样品的含糖量。可溶性糖含量=(回归方程求得糖含量/吸取样品的体积)x提取溶液量x稀释倍数/样品干重,根据情况来确定换算单位。


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