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昆虫细胞色素p450酶活性测定
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-09-27 | 249 次浏览 | 分享到:
细胞色素P450是一种重要的代谢酶,广泛存在于生物体内,参与内源物质和外源化合物的代谢与转化。在昆虫体内,P450酶的表达受环境因素和激素调节,并参与呼吸作用和药物代谢。检测昆虫细胞色素P450酶活的方法常用酶联免疫吸附(ELISA)法,通过双抗体夹心法形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经温育和洗涤后加入底物TMB显色,颜色的深浅与酶活呈线性关系。测定吸光度值(OD值)并通过标准曲线计算样品中的酶活。检测过程需遵循试剂盒说明书,注意试剂保存和操作细节。

细胞色素P450是一种广泛存在需要生物体中的代谢酶,它对内源物质的代谢和转化,以及外源化合物的活性和降解等进行催化和调控。在昆虫体内,P450酶的表达主要受到环境因素和激素的调节。P450酶是一种可以催化生物分子转化和合成的酶类,在昆虫细胞内,P450酶可以参与呼吸作用。当昆虫身体需要排除CO2的时候,P450酶会参与到呼吸链中。在药物代谢的过程中,当昆虫身体有药物的时候,P450酶可以将它转化成生理活性物质或代谢产物,从而具有调节药物的作用。



检测昆虫细胞色素P450酶活的方法,常用的是酶联免疫吸附(ELISA)法。


基本原理:


基于双抗体夹心法,往预先包被细胞色素P450抗体的微孔中加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过温育和洗涤,加入底物TMB显色,TMB在HRP酶的催化作用下显蓝色,并在酸的作用下转化为黄色。颜色的深浅和样品中的细胞色素P450酶活呈线性关系。在酶标仪450nm波长下,测定吸光度值(OD值),通过标准曲线和回归方程,可以计算出样品中的昆虫细胞色素P450酶活。



检测一般是以试剂盒的形式进行,说明书上有详细的操作步骤,使用要求,注意事项。试剂盒包括洗涤液、酶标试剂、标准品、样品稀释液、显色剂、封板膜等,试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖。标本采集后尽早进行提取,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。37℃避光显色10分钟,测定应在加终止液后15分钟以内进行。测定结束,要根据数据计算结果。用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


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