可溶性蛋白,就是比较小的蛋白质分子,小到什么程度呢?可以溶到水或其他溶剂中。我们研究小分子蛋白质有什么用呢?根据科学研究,可溶性蛋白能够提高细胞的保水能力。小分子的蛋白,在细胞的表层,对内部的生命物质和生物膜都有很强的保护作用。在植物中,如果土壤或外部的水比较少,这个小分子蛋白就像保护罩一样,防止水分因为热而导致蒸发,甚至出现细胞水质枯竭的情况。它在细胞的生命活动中具有非常重要的作用,研究植物体内的可溶性蛋白,要能检测出它在植物体内的含量。

检测蛋白含量,这里先了解一下考马斯亮蓝法测定。考马斯亮蓝在游离的状态下是红色的,当它和蛋白质的疏水区结合的时候,就会变成青色。蛋白质的含量和颜色的变化程度是成正比的,在595nm的波长下,可以测定蛋白质和考马斯亮蓝的结合。既然可溶性蛋白能够具有很强的生物膜保护作用,通过检测蛋白的疏水区特点,可以确定可溶性蛋白的含量。考马斯亮蓝能够和蛋白发生作用,在2分钟内就可以快速完成并达到平衡。反应完成的时候所产生的结合物,在室温下是比较稳定的,可以长达1个小时。因此,要在1个小时内完成检测反应,时间是比较充足的。

使用分光光度法来测定可溶性蛋白的含量,一定是需要做标准曲线的。使用分光光度法测定蛋白含量,一般是使用6个点来测定。标准品是100ug/ml的牛血清蛋白,分别取0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,以1ml蒸馏水来作为空白,其他的用蒸馏水补齐到1ml。于是,我们就得到了6个蛋白浓度点:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.10.然后,分别加入5ml考马斯亮蓝,加上瓶塞,混合均匀,放置2分钟后,在595nm下比色,测定不同浓度蛋白的吸光度,并绘制出标准曲线。

对于样品进行处理,吸取0.1ml提取液,加入5ml考马斯亮蓝,充分混合,2分钟后,在595nm的波长下测定吸光度,通过标准曲线,计算出蛋白质的含量。可以采用2个重复,求取平均值。对于蛋白质含量的测定,也可以采用高效液相色谱法完成,在科研方面有什么问题,可以进行交流。