多糖类化合物在硫酸的作用下被水解为单糖，或迅速脱水，就会形成糖醛类的化合物。糖醛类的化合物能够和苯酚发生反应，生产一种橙黄色的化合物。苯酚能够和游离的单糖发生反应，也可以和糠醛类的化合物发生反应，都会产生显色反应。因此，可以通过标准苯酚的量和硫酸化的单糖或糖醛化合物反应，以显色为反应终点，可以测定多糖的含量。

使用苯酚硫酸法测定多糖，就是使用比色法来进行的。

1.使用比色法检测，就先要制作标准曲线。也就是称取标准的葡聚糖（如果用葡萄糖，需要考虑校正系数0.9），分别稀释8个梯度浓度，以0为空白，蒸馏水补充。然后加入6%的苯酚和硫酸溶液，摇匀静置30分钟，要在分光光度计的490nm波长下，测定每个点的吸光度，可以重复三次，求取平均值。做这个标准曲线，以多糖的浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，得到一条标准的曲线，计算出回归方程。

2.测定多糖的含量。这个时候，取多糖样品1.0ml，加入1.0ml蒸馏水。然后，加入6%苯酚1.0ml，迅速加入浓硫酸5.0ml，在涡旋仪上震荡，充分混匀，静置30分钟，于490nm测定吸光度，并将测得的吸光度带入回归方程中，可计算出多糖的含量。

这个是基础的检测，方法并不难。需要在实验的过程中，严格按照操作步骤完成。考察的是对标准品浓度梯度的配置，分光光度计的操作，标准曲线的制作，计算出最终的结果。需要注意的是，加入苯酚和硫酸的时候，需要充分混匀，并静置反应。注意试剂的操作，硫酸具有腐蚀性，做好防护。如果要对多糖的组成和含量进行更准确的检测，可以采用HPLC或LC-MS进行测定。