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酪氨酸酶活性检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-08-07 | 301 次浏览 | 分享到:

酪氨酸酶是一种含有铜糖蛋白的单酚单加氧酶,含有多个亚基,结构复杂。广泛存在于植物、酵母和动物组织中。它是调节黑色素生成的限速酶,比切片的马铃薯暴露在空气中变黑,其实就是被酪氨酸酶氧化了。它对昆虫的免疫和生长有重要的影响。用途比较多,在皮肤美白、抗氧化作用等方面表现尤为突出。



检测样本中的酪氨酸酶活性,方法主要有比色法和酶联免疫吸附(ELISA)法。这里,简单的介绍一下它们的原理和步骤,希望能够有初步的了解。


1.比色法


检测原理:酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素,其在475nm下有特征吸收峰,进而测定出酪氨酸酶的活性。



检测流程:样本处理(组织、细胞、血清或血浆),分光光度计设置,加样,温浴,测定吸光度值,根据公式计算酪氨酸酶活。现在有生化试剂盒,具体步骤可以参考说明书。


2.酶联免疫吸附(ELISA)法


以小鼠酪氨酸酶(TRY)为例,这是一种试剂盒的方法,一种双抗体夹心的检测。将抗小鼠TRY抗体包被在96微孔酶标板上,试剂盒是现成的。实验的时候,将样品或标准品中的TRY和包被抗体结合,其中游离的部分被洗去。接着加入过氧化氢酶标记的亲和素。



TRY抗体与结合在包被抗体上的小鼠TRY结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,TRY浓度与吸光度值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中TRY的浓度。详细参考说明书。


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