咖啡酸是一种有机酸，还是一种天然的酚类化合物，又名3,4-二羟基肉桂酸，可溶于热水、乙醇、具有广泛的抑菌、抗病毒、抗氧化、调节免疫等作用。咖啡酸一般存在于黄花、蒲公英、升麻等中草药植物中，检测植物样本中的咖啡酸含量，对科学研究具有重要的意义。

检测咖啡酸含量的方法有高效液相色谱（HPLC）法、毛细管电泳法、气相色谱-质谱联用（GC-MS）法等。这里，着重说一点HPLC检测方法。

HPLC比较适合植物提取物含量检测，比如咖啡酸等。化合物在色谱柱的分配系数不同，可以将样品中的各组分进行分离，通过流动相逐步洗脱出来，并在检测器中测定含量。根据在软件中记录的色谱图数据，包括峰高和峰面积，对标准品进行梯度进样，对色谱峰面积，制作标准曲线，计算回归方程和回收率。对样品进行测定，并根据标准曲线，计算样品中的咖啡酸含量。

检测步骤包括：样品制备-色谱条件设置-进样测定-数据分析。其中，样品制备是基础的，将含有咖啡酸的样本进行提取、纯化等，得到适合HPLC检测的溶液。对色谱条件的选择，是非常关键的，它也是检测的方法。将色谱系统的各个参数，通过最优化组合设计，获取最佳的匹配结果。比如，选择C18的色谱柱，甲醇-磷酸盐缓冲液为流动相，紫外检测器（323nm波长），进样量、流速和柱温等。对标准品进行梯度进样，进样得到色谱峰，制作标准曲线。在同样的条件下，对样品进行测定，并记录色谱峰数据，计算结果。

在这个过程中，会用到不少的设备。比如，台式离心机，超声波清洗机，烘箱，移液器，过滤器，滤膜，注射器，进样瓶等。实验过程中细微的地方，都可能影响到色谱峰的变化。很多朋友在检测的时候，发现色谱峰不对劲，就去找什么原因。其实，大多数的原因就在于基础的操作和细微的错误。HPLC能够检测多种化合物，特别是复杂的样品分析。具有分离效果好，检测灵敏度高，重复性好的特点。