生长素是最早被发现的植物激素,它是一类含有不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源性激素。其英文简称为IAA,化学本质是吲哚乙酸。在生长素中,最重要的化学物质就是3-吲哚乙酸。生长素是调节茎的生长速率,抑制侧芽,促进根系不断生根。就是,它能够让根向下扎,让茎不断升高。在农业生产过程中,可以用它来插枝生根。

植物吲哚乙酸难溶于水,易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。有光线的情况下,很容易被氧化成玫瑰红色,生理活性也会降低。这里说一下,植物体内游离的吲哚乙酸含量是比较低的,一般是呈酯的或肽的复合物。在生长旺盛的植物组织,或花粉中含量较多。生长素在植物的顶端分生组织中合成,被运输到植物的各个部位,从形态学上端向下端运输。植物的生长并不是靠单一激素的控制,而是多个激素共同起作用,达到一种平衡状态。比如,当生长素不断增加的时候,也在引导乙烯的形成。当生长素超过适当的浓度,就会产生抑制生长的现象。要不然,很多植物会长成怪物了,不能适应自然规律的变化,就会影响到它们自身的生存。

检测植物组织中的生长素IAA含量,其主要方法有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、酶联免疫吸附(ELISA)法等。这里简单的介绍一下,如果需要详细的步骤,或测定含量的话,需要严格按照实验步骤去完成,避免出现遗漏的现象。对于方法的介绍,这是根据科研的需求。方法不同,设备也有差异的,但结果还是相接近的。

1.高效液相色谱(HPLC)法
在使用HPLC检测生长素IAA的过程中,采用常规的C18反相色谱柱,流动相为甲醇和水,进样量为20ul,检测波长254nm,外标法测定。设定适当的流速、梯度洗脱时间和柱温。通过软件记录测定的色谱峰面积,标准曲线的制作是采用6个梯度浓度进行测定,并根据不同浓度的IAA和峰值之间的关系,制作出标准曲线来。对样品进行适当的处理,比如提取等,在相同的条件下上机检测。将检测出来的IAA峰值,结合上面的标准曲线,计算出样品中的IAA含量。这里,还要考虑回收率的问题。

2.气相色谱(GC)法
这种方法没有HPLC常见,但也是可以检测IAA含量的。通过对植物样品进行提取,净化,衍生等处理。将IAA和其他化合物分离,通过GC检测器测定其含量。气相色谱检测,要控制过程中的多种参数,比如柱温,升温速率,色谱柱,检测器等。对于设备的操作,可以参考相关的说明书。而方法的操作,要依据相关的标准或规程,按部就班完成实验。

3.酶联免疫吸附(ELISA)法
检测原理:将已知浓度的标准品,和未知浓度的样品,加入到酶标微孔板内。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温浴,拿出来洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再进行温浴和洗涤步骤,去除未结合的酶结合物,然后加入A、B两种试剂,和酶结合物同时作用,产生颜色。这个颜色的深浅,是和物质的浓度成线性关系的。通过梯度稀释,可以测定吸光度值,并制作标准曲线。对样品检测的数据,结合标准曲线,可以计算出样品中的生长素IAA含量。操作步骤参考说明书,看清楚实验要求和注意事项。