NAD是一种传递电子的生物学物质，是氧化型辅酶Ⅰ。它的体内有很多脱氢酶，能够连接三羧酸循环和呼吸链。将代谢过程中脱下来的氢传递给黄素蛋白，还原形式是NADH。NAD是脱氢酶的辅酶，如乙醇脱氢酶，用于氧化乙醇。NAD在糖酵解，糖异生，三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物将脱下的氢传递给NAD，使之成为NADH。

检测NAD的含量，一般采用竞争抑制酶联免疫（ELISA）法来测定待测样本的含量。

这种方法的原理是：将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中同时加入生物素标记的抗体和待测样本或标准品。温浴后，经洗涤后，加入HRP标记的亲和素，经过温育和彻底洗涤加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，并在酸的作用下转化为黄色。显色的程度和样本浓度成正相关，通过标准品梯度稀释的方式，酶标仪450nm波长处，测定吸光度值，并绘制成标准曲线。根据样本测定值，结合标准曲线，计算出样品中NAD含量。

检测流程：

实验之前，一定要准备好标准品，试剂和样品。如果是试剂盒的话，就要先看清楚说明书的要求。加样，加样的时候需要认真的。比如，要加50ul的样本或标准品，需要校准移液器，确保数据没有大的偏差。有的试剂，在使用前是要现场配制的。加样后在37℃温浴1h，这个时候就要注意了，酶标板中的溶液接受温度会有一点延迟。也就是刚放进去开始计时，到1个小时拿出来，溶液的受热时间未必是1个小时。洗板3次，确保洗涤彻底，无残留。加入检测溶液100ul，37℃孵育30min，洗板5次。加入TMB底物90ul，37℃孵育10-20min，加终止液50ul，在450nm波长处读数。这个时候，要尽快的读数，不要等太长时间，数据又容易出现偏差。