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甜菜碱含量检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-06-06 | 347 次浏览 | 分享到:

甜菜碱是一种生物碱,它的结构和氨基酸类似,属于季铵碱类物质。它广泛存在于动植物体内,比如植物的枸杞、甜菜、豆科植物等都含有甜菜碱,动物的章鱼、虾等也含有甜菜碱。甜菜碱一般是从天然植物的根茎叶和果实中提取出来的,属于重要的次生代谢产物,它能够增强植物的抗逆性,比如抗盐碱,耐旱等。另外,它也被广泛的应用在医学、生物学、食品科学等领域。为了检测植物中甜菜碱的含量,通常情况下要看具体的需求。那么,常见的方法有滴定法、分光光度法、高效液相色谱(HPLC)法等。



1.滴定法


为了准确的测定甜菜碱的含量,就要对样品进行干燥处理,在105℃的烘干到恒重,称取干燥的样品0.4g,加入冰醋酸50mL,加热到溶解的。加入25mL的乙酸汞溶液,冷却至室温。加入结晶紫指示剂2滴就够了,这个时候就可以用高氯酸标准溶液滴定了。高氯酸标准溶液一般用0.1mol/L,这个浓度不能太高,防止滴定终点不准确。在滴定的过程中,如果发现溶液突然变成绿色了,那就是到滴定终点,刚刚好反应完全了。根据消耗的情况,计算出样品中含有甜菜碱的含量,需要将滴定结果用空白试验来校正。



2.分光光度法


检测甜菜碱含量,用分光光度法相对比较简单。首先,将样品溶解到溶剂中,也就是进行适当的稀释。接着,选择适当的检测波长,利用分光光度计测定样品的吸光度值。根据标准曲线,计算出样品中甜菜碱的含量。此外,还可以利用比色的方法完成检测。也就是在pH=1.0的条件下,甜菜碱盐酸盐能够和雷氏盐生成红色沉淀,通过离心,去除上清液留下沉淀。让沉淀溶解在70%的丙酮中并呈粉红色溶液,在525nm处利用分光光度计测定吸光度值,根据标准曲线,计算出样品的甜菜碱含量。



3.高效液相色谱(HPLC)法


含有甜菜碱的植物样品经过甲醇溶液的提取,用混合型阳离子交换固相萃取柱净化,再用乙腈定容,最用在205nm波长的紫外检测器读取数据,记录色谱峰的保留时间,峰高和峰面积,使用外标法定量测定结果。



检测条件


色谱柱亲水作用多孔硅胶色谱柱150 mmXh.6mm,5 um。流动相:乙腈——水,梯度洗脱。流速1.0 mL/ min。柱温30℃,波长205 nm,进样量10.0uL。


标准曲线制作


用乙腈溶液将甜菜碱标准贮备液溶液逐级稀释7个点,作为标准工作液依次由低到高进样。以标准品的浓度为横坐标,以对应的峰面积为纵坐标,进行线性回归,得到标准曲线。


样品检测


取标准工作溶液和样品定容液进样测定,以色谱峰保留时间定性,以标样色谱峰峰面积和样品溶液峰峰面积比较定量。同时做空白实验。


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