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植物多酚氧化酶检测方法
来源: | 作者:上海优选生物 | 发布时间: 2024-06-04 | 197 次浏览 | 分享到:

多酚氧化酶是一种含铜的氧化还原酶,它广泛分布在植物、真菌、昆虫的质体,甚至在腐烂的植物残渣上都检测到它的存在。此外,多酚氧化酶能够催化邻苯二酚氧化成邻苯二醌。在茶叶中,多酚氧化酶能够催化儿茶素形成邻醍,进而形成茶黄素和香气物质。因此,为了让茶叶的品质更高,香气更纯正,往往要控制多酚氧化酶的活性。多酚氧化酶可以做成食品添加剂,可以提高啤酒的质量。



在植物(如苹果、荔枝、菠菜、马铃薯、豆类、茶叶、桑叶等)组织中,多酚氧化酶与内囊体膜结合在一起的,天然状态无活性,但将组织匀浆或损伤后多酚氧化酶被活化,从而表现出活性。植物多酚氧化酶能够氧化植物多酚,通过检测植物多酚被氧化的程度,可以反应多酚氧化酶的活力,检测多酚氧化酶一般用到分光光度法。邻苯二酚和D-儿茶素在多酚氧化酶催化下生成有色产物,其显色物质在460nm处有最大吸收,吸收值在单位时间内的变化和单位酶活性成正比,计算多酚氧化酶活性。



样品和材料的准备,样品就准备植物的叶片或果实,多酚底物就用多巴胺。中间参与的试剂有磷酸盐溶液、酸化酒石酸钠溶液、苯酚酸溶液等。将样品组织进行粉碎,用磷酸盐缓冲液,搅拌2min,离心10min,提取上清液备用。将多巴胺溶液加入酸化酒石酸钠的溶液中,制成浓度为0.01mol/L的底物溶液。



取适量的植物提取液和底物发生反应,混合后在25℃的水浴中1min,加入苯酚酸溶液终止反应,并迅速混匀。吸取反应后的溶液,在可见风光光度计上420nm的波长处测定吸光度值。测定样品中的多酚氧化酶,还是要用到标准曲线,根据标准品的浓度和吸光度之间的线性关系,计算出样品中含有多酚氧化酶的含量。


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