色氨酸的代谢产物主要包括5-羟色胺(5-HT),烟酸(维生素B3),犬尿氨酸及衍生物,褪黑素,吲哚类衍生物(吲哚-3-丙酸,吲哚-3-乙酸等)。其中,5-HT是色氨酸经过色氨酸羧化酶催化生成5-羟色氨酸,再脱羧而形成的。烟酸是色氨酸由犬尿氨酸途径转化而来的,褪黑素是5-HT经过乙酰化和甲基化而生成的,肠道菌群可将色氨酸转化为吲哚-3-丙酸等吲哚类衍生物。
色氨酸的代谢产物主要包括5-羟色胺(5-HT),烟酸(维生素B3),犬尿氨酸及衍生物,褪黑素,吲哚类衍生物(吲哚-3-丙酸,吲哚-3-乙酸等)。其中,5-HT是色氨酸经过色氨酸羧化酶催化生成5-羟色氨酸,再脱羧而形成的。烟酸是色氨酸由犬尿氨酸途径转化而来的,褪黑素是5-HT经过乙酰化和甲基化而生成的,肠道菌群可将色氨酸转化为吲哚-3-丙酸等吲哚类衍生物。
以吲哚-3-丙酸为例,可简称为吲哚丙酸,一般是采用高效液相色谱(HPLC)或液相色谱质谱(LC-MS)测定含量的。
吲哚丙酸是由1个吲哚环和1个丙酸基团组成的,吲哚环能让它具有反应活性,丙酸基团让它有了酸性和一些特定的化学性质。化学式为C11H11NO2,微溶于水,易溶于有机溶剂如乙醇,乙醚,氯仿等。以HPLC为例,简单的介绍一下测定过程。
1.样品处理
将植物组织样本进行粉碎和研磨,采用适合的有机溶剂如甲醇,乙腈等,并采取超声,离心,过滤等一系列的提取操作。比如,0.45um膜过滤,待测。
2.色谱条件
一般采用C18的色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径;柱温25-30℃。用甲醇和水或乙腈和水为流动相,根据出峰情况调整流动相比例。流速1ml/min,进样量10uL,紫外检测器,波长280nm。仅供参考。
3.标准曲线
将吲哚丙酸的标准品用甲醇溶解,并梯度稀释5-7个浓度点。一般最低点为定量限,信噪比(S/N)的10倍,最高点要覆盖到样本溶液可能得范围。调整好仪器设备参数,稳定好状态,依次进样HPLC,测出色谱峰。记录它的保留时间和峰面积,通过峰面积和对应浓度的关系,拟合出标准曲线,得到回归方程。为了确保线性的准确性,相关系数R2要大于0.999,越接近1越好。
4.样品测定
进样HPLC中,得到色谱图,根据保留时间识别出目标色谱峰。对它的面积进行积分,代入到回归方程,计算出样品溶液中的吲哚丙酸含量。这个只是粉碎,研磨,超声,离心,过滤之后的溶液中的含量。如果要知道样品中的含量,还需要根据稀释倍数,逐步还原到样本组织时候的含量。这个一般是有公式计算出来的。