水杨苷，是一种有机物，广泛存在于杨柳的树皮或叶子中。化学式为C13H18O7，分子量286.278，可溶于水，难溶于乙醇，不溶于醚或氯仿，但溶于碱溶液。经过稀酸或苦杏仁酶水解，可生产葡萄糖和水杨醇。水杨醇容易被氧化生成水杨酸，可以用于制药工业。

测定样品中的水杨苷含量，常见的方法有高效液相色谱（HPLC）法、DNS（3,5-二硝基水杨酸）法等。

1.高效液相色谱（HPLC）法

使用HPLC测定水杨苷含量，前处理方法，就是从植物样品中将水杨苷提取出来。

前处理：将植物样品粉碎成粉末，通过大孔树脂分离和正丁醇萃取。

色谱条件：HPLC的色谱条件，是随着实验环境的变化而有所改变的。有标准的方法，如果方法出不来峰或峰形不理想，就要考虑重新开发方法。比如，C18(150mm×4.6mm,5μm)，柱温30℃或25℃。以乙腈和水或甲醇-二乙胺磷酸盐水为流动相，流速1.0ml/min，进样量5-10uL。紫外检测器，波长220或210nm等，这个一般要重新确定。

标准曲线：这是一种外标法，相对准确的测定含量。光线对浓度的信号值，形成色谱峰。依据不同分配系数，流动相的冲洗次序，在软件中记录对应的色谱峰。要判断出来，对应的顺序。利用标准品溶液，对它进行梯度的稀释，至少6个点浓度。依次进样到HPLC中，记录对应浓度的色谱峰。以峰面积为纵坐标，对应浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。为了计算结果的准确性，需要确保线性系数r2＞0.999，重复性rsd＜2%或规定的范围。还要计算一下回收率。

样品测定：对样品的测定，方法和标准品是相似的。对于样品要知道稀释了多少倍，当对测定的色谱峰面积，代入到回归方程，可以计算出浓度。这个浓度要考虑稀释倍数，回收率，才能计算出来真实的含量。

2.DNS法（3,5-二硝基水杨酸）

DNS法也是一种常用的水杨苷测定方法。水杨苷和酶在一定的条件下，会产生酶解反应，生成葡萄糖。在这个过程中，在沸水浴中加入3,5-二硝基水杨酸试剂，显色反应。冷却后，测定吸光度值。通过梯度稀释不同浓度标准葡萄糖溶液，测定对应的吸光度值，绘制标准曲线。通过测定样品的吸光度值，可以计算出样品中水杨苷被水解产生的葡萄糖含量，从而反应出酶的活力，进一步计算出样品中的水杨苷含量。