在植物体内，蔗糖是重要的光合作用产物，是碳水化合物的储存形式之一。目前，蔗糖合成酶和蔗糖磷酸酶是植物体内合成蔗糖的重要的酶。通过测定这两种酶的活性，可以判断出植物组织合成蔗糖的能力。

蔗糖合成酶能够催化游离果糖和二磷酸尿苷葡糖反应生成蔗糖，蔗糖磷酸合成酶能够催化二磷酸尿苷葡糖和果糖-6-磷酸结合形成磷酸蔗糖，6-磷酸蔗糖经过磷酸蔗糖酶的水解形成蔗糖。果糖是酮糖，可以和间苯二酚混合加热生产红色的产物，在一点范围内糖的含量和反应颜色是成正比的。蔗糖在含有颜色的间苯二酚中水解为葡萄糖和果糖，也能生成红色产物。因此，可以利用这个特征采用比色法来测定样品中的酶活，确定一下检测的波长，测定吸光度和浓度的关系，基于标准曲线，计算出样品中的蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量。

所需设备：冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计。

试剂：HEPES-NaOH缓冲液，0.1%间二苯酚，30%盐酸，2mol/L NaOH，100mmol/L6-磷酸果糖，果糖。

称取0.5g的植物样品，洗净剪碎，放在研钵中，加入HEPES-NaOH的缓冲液，冰浴研磨，离心10min，备用。

在测定酶活的过程中，依次加入50uL粗酶液，50uLHEPES-NaOH缓冲液，20uL 50mmol/L MgCl2，20ulUDPG,20uL6-磷酸果糖。在30℃的水浴中反应30min，加入200ul的2mol/LNaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却。加入1.5mL30%的颜色和0.5ml0.1%的间苯二酚，摇匀后放在80℃的水浴保温10min，冷却后。在分光光度计的480nm的波长处，检测溶液的吸光度值，以空白作为对照。

检测的过程中，离不开标准曲线的。比如取0,40,80,120,160,200ug/mL的蔗糖溶液50uL，操作步骤和上面相同，测定吸光度值。以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光度值为横坐标，得到标准曲线及回归方程。最后，根据标准曲线，计算出样品中的蔗糖合成酶活力。